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全息扫描定量—全息扫描定量

DIA (Data independent acquisition)

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DIA(Data independent acquisition)是基于静电场轨道阱Orbitrap带来的一项全新的、全息式数据非依赖性采集定量技术。DIA将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口,高速、循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂及检测,从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的全部碎片信息。DIA无需指定目标肽段,扫描点数均匀,利用谱图库即可实现定性确证和定量离子筛选,并可实现数据回溯。

实验流程



DIA,数据非依赖采集,蛋白质组


*构建spectral library:DIA分析首先需对实际样本进行深度DDA分析,以获得实际样本的质谱图库,即spectral library构建,作为DIA分析使用数据库,实现大数据高精度分析。


应用方向

DIA专为大样本量分析应用而生:

▶ 疾病精准分型、品系研究比较:DIA实现更加准确的定量结果,从而更精确反映疾病亚型、品系间的差异。

▶ 生物标志物发现:DIA接近MRM的定量能力,实现标志物筛选与初步验证过程合二为一。

▶ 生物样本信息库构建:DIA可实现生物信息的完整保存,为后续回溯分析提供保障。

数据分析

蛋白质鉴定结果统计表蛋白质表达火山图
蛋白质定量结果统计表差异表达蛋白质聚类分析
GO功能注释统计表差异表达蛋白质GO注释分析
KEGG通路注释统计表差异表达蛋白质KEGG通路分析
/KEGG通路图详细展示
/差异表达蛋白质构建蛋白质互作网络图

技术优势

▶ 全息扫描:数据覆盖度提高近40%,数据随机缺失值减少数倍;

▶ 超高重现性、稳定性:鉴定重复率提升近40%,定量精密度提升近1倍;

▶ 超高精确度:定量能力接近金标准SRM / MRM技术;

▶ 可回溯性:可实现回溯性分析以及多批数据整合分析。

参考文献

1.

Identification of novel response and predictive biomarkers to Hsp90 inhibitors through massspectrometry-based proteomic profiling of patient-derived prostate tumor explants. Mol Cell Proteomics. 2018.

2.

Extending the limits of quantitative proteome profiling with data-independent acquisition and application to acetaminophen-treated three-dimensional liver microtissues. Mol Cell Proteomics. 2015.

3.

Rapid mass spectrometric conversion of tissue biopsy samples into permanent quantitative digital proteome maps. Nat Med. 2015.

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